操作指南

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                              骨髓染色體標本制備通常用于白血病患者,特別是急慢性粒細胞的白血病的檢查,也適用于淋巴細胞性白血病。骨髓細胞處于生長分裂期,可以直接取樣制備染色體標本片,為了增加細胞的分裂相數量,可在加入秋水仙素的培養液中作短暫的培養。再收集細胞制備染色體標本片,會獲得較滿意的分裂相數目。

                              1. 骨髓細胞短期培養法

                                  培養液配方:RPMI 1640       80%

                                                   小牛血清           20%

                                                    雙抗                100單位/毫升

                                                    肝素                100單位

                              配好后分裝成每瓶5毫升,冰凍保存,用滅菌的注射器從髓骨抽取骨髓液0.2-0.4毫升,直接注入預熱37℃的培養液中搖勻,37℃培養24-48小時后,加入秋仙素(10微克/毫升)0.1毫升,繼續培養4-6小時,終止培養收集細胞。

                              低滲、固定、制片等步驟與外周血染色體標本制備相同。

                              2. 骨髓細胞直接制片法

                              用滅菌的注射器從隋骨抽取骨髓液0.3-0.5毫升,立即注入含秋仙素0.1-0.05微克/毫升的生理鹽水(5毫升)中,用滴管輕輕吸動,將骨髓的脂肪顆粒充分洗掉,平衡離心速度1000-1500/分,時間8-10分鐘,棄上清。加入含同樣秋水仙素濃度的生理鹽水2-3毫升,37℃放置2-3小時,平衡離心,時間速度同上,棄上清。加低滲液5毫升,打勻后37℃水浴10-15分鐘,離心棄上清,固定、制片的方法按外周血染色體標本制備進行。

                              3. 注意事項

                              1)骨髓染色體標片制備的成敗,首先取決于骨髓液,抽取骨髓太少或太稀,細胞數量過少,不易獲得較多的中期細胞,要進行核型分析就更困難了。故要足夠的骨髓量和細胞數。細胞數量要求達3×106/毫升。通常作短期培養能增加細胞數目,提高成功率。

                              2)骨髓材料中脂肪顆粒較多,必須充分洗掉,否則影響標片的質量。




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